测定LD50常用动物为小白鼠，体重18－22g，雄雌均可（雌的不得怀孕）将不同性别和体重的动物均匀分成4或6组，每组10只。给药途径和临床应用相同，给药容量以0.5ml为宜。一般观察3天，以死亡为主要指标。

　　1．机率单位比例法精密称取适量的检品（如系溶液可精密量取），按等比级数（0.1、0.3、0.9……）或等差级数（0.1、0.2、0.3……）配成4种或6种浓度，分别用于4组或6组小白鼠，观察在一定时间内死亡情况，找出使小白鼠死亡数在50％以上和50％以下的两个剂量（如各组小白鼠均无死亡或全死亡则表示剂量选择不当，须更换较高或料低剂理重试），按下列公式计算出半数致死量。

　　M＝高剂量的对数值

　　N＝低剂量的对数值

　　A＝高剂量所致小白鼠死亡百分率（大于50％）的机率单位

　　B＝低剂量所致小白鼠死亡百分率（小于50％）的机率单位

　　5＝50％死亡百分率的机率单位

　　例：乌头碱注射液急性毒性试验结果。见下表。

乌头碱注射液急性毒性试验结果

LD50=24.60mg/kg

　　2．简化机率单位法

　　（1）剂量预试：取小白鼠9只，均分3组，将被试药物分大中小3个剂量，每个剂量各给1组动物观察一定时间的死亡情况。如3组全死或全不死，应重新选择剂量再试，二至找到死亡率大于和小于50％的剂量。

　　（2）正式试验：取18－22g的健康小白鼠，雌雄兼有，按体重、性别均匀分组，每级10只。将预试中的找到的剂量范围按等比级数分成2－4个剂量（须有使动物死亡率大于50％和小于50％的两种剂量），剂量间的比例范围内为宜。每个剂量各给1组动物。给药生观察3天（有的可延长到7天），记录动物的一般状态和死亡数目。根据各剂量的组的死亡率，简化机率单位求出LD50，其分工如下：

　　式中I为相邻两剂量比值（高剂量分子）的对数：y为各组死亡率相应的机单位；y为各机率单位的平均数；X1为小剂量的对数值。

　　【注】用本法则定药物的LD50，在一般情况下采用两组即可，将实验果代入分2组时的公式中求出。分3组、4组皆可，分组多，用动物多，计算复杂，但更准确。

　　例：某新药，要测定对小白鼠口服给药的LD50，首先进行剂理预试，将该药物先分为700、800和1000mg/kg3种剂量，每剂量给3只小白鼠灌胃，观察2天，结果700mg/kg组死亡1只，800mg/kg组残废只，1000mg/kg组全部死亡。这样，就找到了死亡率小于50％的剂量为700mg/kg；大于50％的剂量为800和1000mg/kg，依上述情况。估计用670和800mg/kg可使动物死亡20％和60％左右，两组剂量之比670／800为0.84.符合本法剂量比值范围的要求。若分2组时用此两剂量可以实验；若用3组时，可按同样的剂量比求出第三组剂量，即800／0.84＝952.这样，670、800和952mg/kg3个剂理组即成等比级数，其中每相邻两剂量比均为0.84.然后各剂量的组均给10只动物，观察3天，记录动物的一般状态和死亡情况，结果如下表：

LD50实验观察表